近日，錦旗生物聯合江南大學聯合研發的乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei) CCFM1074/JN-03中國發明專利獲批。乾酪乳桿菌CCFM1074/JN-03可緩解類風濕性關節炎，有望幫助改善患者因類風濕性關節炎帶來的生活負擔。乾酪乳桿菌(Lactobacillus casei)的培育過程僅需培養基以及一些培養條件的控制，成本相對低廉，與造價昂貴的生物制劑相比，不會對類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)患者帶來太大的經濟負擔。可作為益生菌添加到食品、保健品或藥品中。

市場規模

　　在中國，類風濕關節炎的患病率已按年復合增長率0.6%，由2015年的5.8百萬例增至2019年的5.9百萬例，並預期將繼續按年復合增長率0.7%由2020年的6.0百萬例增至2024年的6.1百萬例。同時，中國類風濕關節炎藥物的銷售收入由2015年的84億元快速增加至2019年的133億元，年復合增長率為12.3%，並預期2020年至2024年期間將進一步按22.2%的年復合增長率增加，2024年達到352億元。

疾病特點

　　類風濕關節炎是一種慢性、系統性自體免疫紊亂疾病，特點為關節滑膜炎癥、血管翳形的慢性炎癥，常見臨床表現為關節僵直、腫脹、疼痛，隨疾病進展會引起關節的軟骨及骨組織的破壞，最終導致關節畸形及活動能力障礙。而且類風濕關節炎無法治愈， 患者一旦被確診，常常會感覺“生不如死”，所以人們常說類風濕關節炎是“不死的癌癥”。類風濕關節炎如果不控制，隨著損害的發展，最終會出現關節殘疾，嚴重影響日常生活。

幹酪乳桿菌CCFM1074/JN-03功能介紹

來源及常用功能

　　幹酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CCFM1074是從來源於無錫地區的健康人體腸道中分離得到的，具有較強的耐酸耐膽鹽性能。目前該菌保藏於廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC No .60766。經研究結果證實CCFM1074/JN-03能緩解類風濕性關節炎的的主要功能如下：

　　1.顯著降低類風濕性關節炎的關節厚度、臨床評分以及發病率

　　2.顯著降低類風濕性關節炎血清中促炎性細胞因子TNFα和IL-1β的含量

　　3.顯著調節類風濕性關節炎糞便中短鏈脂肪酸的含量

　　4.顯著降低類風濕性關節炎腸系膜淋巴結中Th17和Treg細胞的比例

　　5.在屬水平改善類風濕性關節炎的腸道菌群

　　6.可顯著抑制類風濕性關節炎致病菌普氏菌(Prevotella copri)的生長

有效劑量

　　用於預防和/或治療類風濕性關節炎的產品，幹酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)CCFM1074的活菌數為不低於1×105 CFU/mL或1×105 CFU/g。

專利號：201911043598.1

　　發明名稱：一株可緩解類風濕性關節炎的幹酪乳桿菌及其應用

　　摘 要

　　本發明公開了一株可緩解類風濕性關節炎的幹酪乳桿菌及其應用，屬於微生物技術領域。本發明篩選出了一株幹酪乳桿菌CCFM1074，此幹酪乳桿菌CCFM1074具有緩解類風濕性關節炎的作用，具體體現在：顯著緩解類風濕性關節炎大鼠的體重損失;顯著降低類風濕性關節炎大鼠血清中促炎性細胞因子TNFα和IL‑1β的含量;顯著調節類風濕性關節炎大鼠糞便中短鏈脂肪酸的含量;顯著降低類風濕性關節炎大鼠腸系膜淋巴結中Th17和Treg細胞的比例;在屬水平改善類風濕性關節炎大鼠的腸道菌群;在體外可顯著抑制類風濕性關節炎致病菌普氏菌的生長。

發明的背景技術

201911043598.1發明專利說明書中指出

　　技術領域

　　[0001] 本發明涉及一株可緩解類風濕性關節炎的幹酪乳桿菌及其應用，屬於微生物技術 領域。

　　背景技術

　　[0003] 類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)在世界各地均有發病，我國北方地 區為本病的高發區。因此，類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)的預防以及治療具 有重要的理論與社會意義。

　　[0004] 目前，在治療類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)方面，臨床上局限於使 用一些以炎性因子IL-6或TNFα等為靶標的生物制劑，這些生物制劑在臨床短期應用中效果 良好，但其只能暫時緩解和改善病情，很難從根本上控制病情的發展，具有復發性，並且，其 造價昂貴，另外，生物制劑屬於強行阻止體內免疫炎癥的聯級反應，長期使用會導致患者的 免疫系統被過度抑制，會有誘發其他疾病的風險。

　　[0005] 在預防類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis，RA)方面，臨床上則尚不存在針 對類風濕性關節炎的具有明確預防作用的藥物，這主要是因為類風濕性關節炎的發病過程 錯綜復雜，除涉及多種免疫細胞，如淋巴細胞、樹突細胞、巨噬細胞等，還涉及到機體共生 菌。例如，研究表明，CD4+T細胞及其亞型(Th1、Th2、Th17、Treg等細胞)的發育和分化會參與到類風濕性關節炎的免疫應答中，在類風濕性關節炎患者外周血中能檢測到異常高的Th17 細胞和減少的Treg細胞，二者細胞的失衡與疾病發生相關(具體可見文獻：Komatsu ,N .,et al .,Pathogenic conversion of Foxp3+Tcells into TH17 cells in autoimmune arthritis .Nat Med ,2014 .20(1):p .62-8 .)。也有研究發現，類風濕性關節炎病人腸道內 Prevotella、Parabacteroides、唾液乳桿菌等的豐度會上升，Prevotella copri具有誘發 類風濕性關節炎的作用(具體可見文獻：Pianta ,A .,et al .,Evidence of the Immune Relevance of Prevotella copri ,a Gut Microbe ,in Patients With Rheumatoid Arthritis .Arthritis Rheumatol ,2017 .69(5):p .964-975 .)。此外，口腔的牙齦卟啉單胞菌、腸道的分節絲狀菌也會影響關節炎病情的發生和發展(具體可見文獻：Sato ,K .,et al .,Aggravation of collagen-induced arthritis by orally administered Porphyromonas gingivalis through modulation of the gut microbiota and gut immune system .Sci Rep ,2017 .7 (1) :p .6955 .和Wu ,H .J .,et al .,Gut-residing segmented filamentous bacteria drive autoimmune arthritis via T helper 17cells .Immunity ,2010 .32(6):p .815-27 .)。

　　[0006] 因此，仍需找到一種藥物或治療方式，既能夠在預防和/或治療類風濕性關節炎 (Rheumatoid Arthritis，RA)的方面發揮根本上的作用，同時，也不會給類風濕性關節炎 (Rheumatoid Arthritis，RA)患者帶來任何潛在的安全隱患，並且，成本低廉。

發明的主要內容

　　技術問題

　　[0008] 本發明要解決的技術問題是提供一株可緩解類風濕性關節炎的幹酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)。

　　技術方案

　　[0010] 為解決本發明的技術問題，本發明提供了一株幹酪乳桿菌 (La cto ba cillus casei)CCFM1074，所述幹酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CCFM1074已於2019年09月05日 保藏於廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為GDMCC No .60766，保藏地址為廣州市先烈 中路100號大院59號樓5樓。

　　[0013] 本發明還提供了一種制備預防和/或治療類風濕性關節炎的產品的方法，所述方法為使用上述幹酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CCFM1074。

　　[0015] 在本發明的一種實施方式中，所述產品包含食品或藥品。

　　[0016] 在本發明的一種實施方式中，所述藥品含有上述幹酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)CCFM1074、藥物載體和/或藥用輔料。

　　[0017] 本發明的一種實施方式中，所述食品包含含有上述幹酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CCFM1074的保健食品;或所述食品包含使用含有上述幹酪乳桿菌(Lactobacillus casei)CCFM1074的發酵劑生產得到的乳制品、豆制品、肉制品或果蔬制品。

　　本發明原理

　　是通過使用固體培養基劃線純化典型菌落得到的幹酪乳桿菌CCFM1074。再通過II膠原誘導的關節炎小鼠模型(Collagen-induced arthritis，CIA)來驗證此菌對於類風濕性關節炎有緩解作用。

幹酪乳桿菌CCFM1074/JN-03研究

　　胃液腸液耐受性試驗

　　幹酪乳桿菌CCFM1074在模擬胃酸pH=3，含有3g/L胃蛋白酶的條件下作用3h、在模擬腸液ph=8，含有1g/L胰蛋白酶和0.3g/L膽鹽的條件下作用3h。檢測存活率如下：

　　類風濕性關節炎致病菌普氏菌(Prevotella copri)的影響試驗

　　將幹酪乳桿菌CCFM1074、鼠李糖乳桿菌LGG與普氏菌共培，得到結論：幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG與普氏菌共培養時對普氏菌的抑制率分別為80 .9%和54 .7%。可見，幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG與普氏菌共培養時，均可抑制普氏菌的生長，但幹酪乳桿菌CCFM1074對普氏菌的抑制作用明顯強於鼠李糖乳桿菌LGG。

　　關節炎小鼠模型試驗

　　以通過II膠原誘導的關節炎小鼠為模型，通過餵食使用固體培養基劃線純化典型菌落得到的不同幹酪乳桿菌。考察對類風濕性關節炎大鼠體重、關節厚度、臨床評分 以及發病率的影響。設立鼠李糖乳桿菌LGG為對照組。結果表明

　　1.治療風濕性關節炎方面

　　連續三周，可有效緩解大鼠類風濕性關節炎的癥狀，在預防和/或治療類風濕性關節炎上有極好的效果。

　　2.預防風濕性關節炎方面

　　幹酪乳桿菌CCFM1074可治療以及預防風濕性關節炎，其中，幹酪乳桿菌 CCFM1074在治療方面的效果與鼠李糖乳桿菌LGG相近，但預防疾病發生的效果強於鼠李糖乳桿菌LGG。

　　3.針對風濕性關節炎的關節腫脹和臨床評分方面

　　每組大鼠臨床評分的變化與關節厚度的變化曲線相似，第2周時臨床評分開始增加，模型組的最高，CCFM1074組大鼠和LGG組相接近，而在第5周時，LGG組的臨床評分與模型組接近，高於CCFM1074組。

　　4.針對風濕性關節炎的抑制炎癥方面

　　幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG均可降低類風濕性關節炎大鼠血清中促炎因子IL-1β和TNFα的水平，但幹酪乳桿菌CCFM1074抑制促炎性細胞因子的作用是強於鼠李糖乳桿菌LGG的。

　　5.針對風濕性關節炎的腸道條件改善方面

　　1 幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG均 可提高類風濕性關節炎大鼠糞便中短鏈脂肪酸的含量，但幹酪乳桿菌CCFM1074提高短鏈脂肪酸含量的作用是強於鼠李糖乳桿菌LGG的。

　　2 類風濕性關節炎會導致大鼠腸系膜處Treg和Th17細胞的比例失衡，幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG則可提高類風濕性關節炎大鼠腸系膜處Treg細胞的比例，降低風濕性關節炎大鼠腸系膜處Th17細胞的比例，使之恢復平衡，但幹酪乳桿菌CCFM1074對此的調節作用是強於鼠李糖乳桿菌LGG的。

　　3 類 風 濕 性 關 節 炎 會 導 致 大鼠 糞 便中 副 擬 桿 菌 屬(Parabacteroides)、梭菌屬(Clostridium)以及厭氧支原體屬(Anaeroplasma)豐度失衡，幹酪乳桿菌CCFM1074和鼠李糖乳桿菌LGG則可降低類風濕性關節炎大鼠糞便中副擬桿菌屬(Parabacteroides)和梭菌屬(Clostridium)的相對豐度，提高風濕性關節炎大鼠糞便中厭氧支原體屬(Anaeroplasma)的相對豐度，使之恢復平衡，但幹酪乳桿菌CCFM1074對此的調節作用是強於鼠李糖乳桿菌LGG的。

文獻支持

　　[1] Fan Z , Yang B , Ross R P , et al. Protective effects of Bifidobacterium adolescentis on collagen-induced arthritis in rats depend on timing of administration[J]. Food & Function, 2020, 11.

　　[2] Fan Z , Yang B , Ross R P , et al. The prophylactic effects of different Lactobacilli on collagen-induced arthritis in rats[J]. Food & Function, 2020, 11(4).