錦旗高光 | 口腔益生菌研究新突破——國內首個口腔益生菌片劑IRB臨床試驗完成並發表SCI期刊

　　3月25日，錦旗生物集團研發中心又傳來創新成果：國內首個口腔益生菌片劑IRB臨床試驗完成，並在SCI期刊發布。

　　此次臨床試驗是錦旗生物集團作為中國第一個自主研發知識產權三株菌(唾液乳桿菌AP-32、 副幹酪乳桿菌 ET-66、和植物乳桿菌 LPL28 的)以口腔益生菌片劑的形式國內首個通過IRB審核口腔益生菌含片的臨床RCT試驗，取得了口腔益生菌功效人體驗證方面的4項新突破。結果發表在《Oral Diseases》SCI期刊(影響因子：2.613)上。這意味著中國預防齲齒大健康領域迎來益生菌活菌有效的新證據，將造福中國口腔疾病患者。

　　四項新突破

　　為口腔益生菌研究開啟新賽道

　　本試驗臨床試驗發現唾液乳桿菌 AP-32 (Lactobacillus salivarius subsp. salicinius)、副幹酪乳桿菌 ET-66 (Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌 LPL28 (Lactobacillus plantarum)是十分有效的口腔保健食品添加菌菌株。不僅可以有效降低口腔內變形鏈球菌菌數、改善口腔內微生物菌相、增加唾液內 IgA 抗體的表現、減少口腔感染，還可以改善受試者的腸道癥狀，緩解便秘、減少胃食道逆流和胃痛、降低感冒發生率及每天的昏沈感。比起去活性菌體及益萃質，具活性的益生菌菌株(viable probiotics)之口腔保健功能更為顯著，是最優良的口腔保健食品添加物。

　　本次試驗成果備受矚目，主要有以下四項創新突破：

　　1、 試驗方式經科學驗證：通過醫院倫理委員會正式審批，經醫學、藥學、法律專家審查試驗方式合理具有科學可實施性。

　　2、 可信度區間高：使用循證醫學等級最高、臨床研究的金標準——RCT隨機雙盲對照來進行試驗，促進口腔健康的結果具有更高可信性。

　　3、 測試技術突破：國內首個從基因測序的角度來驗證使用益生菌後對人體口腔微生物影響分析，使用新一代高通量測序NGS技術。

　　4、 口腔益生菌劑型突破：國內首個口腔益生菌含片臨床試驗，錦旗生物首次將三株口腔專利益生菌應用在口腔益生菌含片上進行臨床效果驗證。

　　口腔益生菌解決方案專家

　　守護中國國民口腔大健康

　　口腔健康是全身健康的基礎，全球近一半人口患有口腔疾病，針對國人口腔問題，錦旗生物早在多年前就已致力於口腔益生菌領域的科研實踐與應用。從獨有菌種庫上千株菌株篩選選拔出來專利口腔益生菌配方，打造完整針對口腔功效價值的整體解決方案。此次使用包含唾液乳桿菌AP-32、 副幹酪乳桿菌 ET-66、和植物乳桿菌 LPL28 的片劑進行的隨機對照試驗驗證了含錦旗生物集團口腔專利益生菌菌株的口含片可以增強口腔免疫反應同時有助於口腔健康。

　　試驗意義

　　1.研究已知資訊

　　許多報道表明，食用益生菌，如乳酸桿菌和雙歧桿菌，可以通過分泌抗菌物質來平衡微生物，與口腔病原體競爭的營養物質，加強粘膜屏障，減少生物膜形成，改善口腔微生態。此外，服用益生菌還可以使口腔變形鏈球菌數量減少，牙菌斑減少。因為益生菌可以與口腔的病原菌彼此競爭口腔內養分，抑制其生長並可以加強黏膜的分泌與屏蔽，可有效降低病原菌的附著性並且改善口腔內的微生物相，除此之外，益生菌亦可分泌抑菌物質如抗菌肽及短鏈脂肪酸達到降低致病菌的存活度，以及降低因致病菌感染所導致的發炎現象(Lin et al., 2017; Villavicencio et al., 2018)。並抑制口臭。

　　2.研究新發現

　　我們研究發現，下一代測序NGS結果顯示，食用添加混合益生菌(唾液乳桿菌AP-32、 副幹酪乳桿菌 ET-66、和植物乳桿菌 LPL28)含片的受試者口腔中唾液乳桿菌的口腔微生物群顯著增加。兩周內觀察活菌的抗菌活性。試驗組患者口腔內IgA水平及乳酸桿菌和雙歧桿菌豐度均顯著升高。大多數參與者報告說，他們的口腔健康狀況和腸道癥狀得到了改善。

　　3.研究臨床應用

　　我們研究證實，(液乳桿菌AP-32、 副幹酪乳桿菌 ET-66、和植物乳桿菌 LPL28)益生菌可作為口腔保健的輔助食品。

　　試驗設計

　　1.試驗模式

　　招募了20至40歲的健康成年人。其中，吸煙者和全身疾病者被排除在外。50名每毫升唾液中顯示超過105個變形鏈球菌cfu的參與者被邀請參加這項臨床研究，並隨機分為兩組：安慰劑組和益生菌口含片組。

　　2.試驗流程

　　牙齒徹底清潔後，每位參加者可每天服用三粒3g 3X109CFU活菌口服含片(早、中、晚/餐後服用)，為期4周。收集第0、2和4周的唾液樣本，分析口腔微生物區系、IgA水平和口腔病原體豐度。在第0、2和4周進行了關於改善口腔健康的問卷調查。口腔中的牙菌斑總數被采集稱重。

　　3.檢測方法

　　lgA和牙菌斑的分析：lgA使用人類IgA ELISA工具，而牙菌斑脫水後稱重;口腔微生物和病原體的分析：唾液樣品分別用桿菌肽、平板計數瓊脂(PCA)和MRS用0.05%半胱氨酸瓊脂肉湯在唾液腺炎培養基上鍍一式三份，分別檢測變形鏈球菌、口腔細菌總數、乳酸桿菌和雙歧桿菌。同時，對口腔微生物群進行了NGS分析;常見牙齒問題及胃腸道評估：問卷調查。

　　試驗結果

　　1.AP-32、ET-66和LPL28是開發口腔保健功能食品最合適的菌株

　　體外抗致病性試驗使用了一種改良的雙層瓊脂共孵育法來評價和選擇口腔保健益生菌菌株。結果發現：AP-32、ET-66和LPL28是開發口腔保健功能食品最合適的菌株。

　　2.AP-32、ET-66和LPL28有助於口腔保健、胃腸健康和免疫力

　　口腔健康調查問卷分析結果(表一)顯示食用含益生菌(去活性或具有活性)的口含片可以有效的減少嘴破及口腔內膿包的產生，進而減少口腔的細菌感染。益生菌或其益萃質的添加也可以進一步促進口水的分泌，可以保持口腔濕潤，口水中的IgA更有預防細菌感染的效果。此外，食用具活性的AP-32, ET-66及LPL28還可以顯著減少咽喉炎及喉嚨痛的發生。腸道癥狀健康調查分析結果(表二)中，發現具活性的益生菌可以有效減少胃痛發生率，而食用含活性或去活性益生菌或其益萃質的口含片皆可以在4周內改善便秘情形，而在食用4周後，胃食道逆流發生率、感冒發生率、每天昏沈感都有顯著下降。總之，食用益生菌或其益萃質的口含片除了可以有效減少口腔內病原菌，改善口腔內菌相，還可以有效改善受試者的腸道癥狀，緩解便秘、減少胃食道逆流和胃痛、降低感冒發生率及每天的昏沈感。

　　3.口腔中的變形鏈球菌、口腔細菌總數、乳酸桿菌和雙歧桿菌分析

　　口服具有活性益生菌菌株AP-32，ET-66和LPL28的口含片，可以有效的在第2周時顯著降低口腔內變形鏈球菌菌數達45%，並於第四周時顯著降低了72%。在口腔中的生物負荷顯著降低。另外使用 PCA 瓊脂平板分析口腔中的總環境細菌數。

　　數據表明，具有活性益生菌的施用顯著減少了口腔中的細菌總數。口服益生菌含片增加了雙歧桿菌和乳酸菌的口腔數量。

　　4.NGS數據顯示，口服益生菌含片增加了口腔微生物數量

　　我們分析了口服含片是否含有活菌，唾液乳桿菌亞種。水楊桿菌AP-32、副幹酪乳桿菌ET-66和植物乳桿菌LPL28影響了NGS對口腔總微生物群的影響。飼餵益生菌含片後，未分類乳酸菌數量與安慰劑組相比有統計學差異(益生菌組= 100;安慰劑組= 4;p < 0.05)。與安慰劑組相比，益生菌組的牙雙歧桿菌水平略有升高(p < 0.05)。然而，與基線相比，食用益生菌含片並沒有增加雙歧桿菌數量(圖三)。與安慰劑組相比，唾液乳酸桿菌水平(益生菌組= 200;安慰劑組= 6，***p < 0.001)服用口服含片後顯著增加(圖3)。NGS結果與圖所示MRS培養測試結果一致。

　　5.IgA檢測結果顯示，益生菌能改善IgA水平改善口腔狀況

　　此外，益生菌還能刺激唾液分泌，保持體內水分補充口服含片後，唾液中IgA含量升高。唾液和抗體的增加可能是口腔疾病減少的原因之一致病菌與咽喉發炎癥狀緩解(表二) (Monteiro, 2014)。需要進一步的試驗和長期的測試來證實這些結果。

　　試驗結論

　　本試驗臨床試驗發現唾液乳桿菌 AP-32 (Lactobacillus salivarius subsp. salicinius)、副幹酪乳桿菌 ET-66 (Lactobacillus paracasei)、植物乳桿菌 LPL28 (Lactobacillus plantarum)是十分有效的口腔保健食品添加菌菌株。不僅可以有效降低口腔內變形鏈球菌菌數、改善口腔內微生物菌相、增加唾液內 IgA 抗體的表現、減少口腔感染，還可以改善受試者的腸道癥狀，緩解便秘、減少胃食道逆流和胃痛、降低感冒發生率及每天的昏沈感。比起去活性菌體及益萃質，具活性的益生菌菌株(viable probiotics)之口腔保健功能更為顯著，是最優良的口腔保健食品添加物。

　　文章已發表於: 2021 Mar 22. doi: 10.1111/odi.13854.

　　當前，中國口腔保健需求日益增長，政策利好不斷，無論是市場需求、行業成長空間還是社會責任，口腔益生菌領域都急需力量註入。針對國人口腔問題，錦旗生物早在多年前就已致力於口腔益生菌領域的科研實踐與應用。從獨有菌種庫上千株菌株篩選選拔出來，綜合評比，潛力配方組合及優勢劑型設計，並與臺灣口腔及牙醫學權威機構「中山醫學大學」合作進行人體臨床試驗，研發出市場領先臨床實證的專利口腔益生菌配方，打造完整功效價值的整體解決方案。紮根益生菌領域數十載，錦旗生物不僅是專業的益生菌品牌原料供應商，更是口腔益生菌解決方案專家，未來也將肩負“中國好菌 守護健康”使命，持續守護中國國民口腔大健康，推動中國口腔益生菌新未來!